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固相萃取的三大常见问题
发布:kittyll   时间:2017/2/22 10:51:29   阅读:1628 
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关于固相萃取(SPE),有三大最常见的问题,分别是:回收率低、重现性差和样品提取物不够纯净。
 
 
要解决回收率和重现性的问题,首先我们要验证分析系统的运行情况是否正常。
 
重现性的问题可能由以下几种情况引起:样品的残留,检测器问题或有缺陷的自动进样器。
 
可以通过将含有已知标准样品的提取溶剂注入仪器,来验证分析仪器的响应因子是否发生了改变。重复进样纯标准可以验证进样的重现性,而重复进样不同浓度的标准(浓度由高到底,甚至到非常低的水平)可以验证残留问题。
 
然后需要对SPE操作的每一步进行评估,因为如果分析物在任何地方发生了损失都会导致较低的回收率。
 
该评估首先需要制定萃取过程的标准流程,然后收集每一个拟定步骤中的馏分,最后进行分析以确定分析物是否正在流失。如果发现是在载样过程或清洗步骤的话,就要检查这些步骤中所使用的溶剂、采用的条件或预平衡等是否正确,因为这些因素的影响都具有保留性。
 
尝试改变样品溶剂或洗涤步骤,以提高吸附剂的保留机制。
 
如果分析物是被保留在柱上但不能很好地被洗脱,那需要表明溶剂是正确的,然后需要增加洗脱剂的洗脱强度。此外,分析物与吸附剂两者可能存在二次相互作用,所以应选择合适的洗脱溶剂来解决这一问题。最后,也许有必要更换一种对目标成分保留性弱的吸附剂。
 
 
如果SPE操作过程一切正确,那很可能被分析物并未吸附在柱上或进入柱后直接被破坏掉了,所以在馏分中检测不到分析物。
 
前者的问题可能是由于样品中的分析物不稳定导致;同时假如样品预处理过程涉及到蛋白质沉淀而目标分析物会与蛋白质发生结合,那么分析物就随蛋白质一同沉淀也会导致上述问题。
 
另外,生成的与蛋白结合的分析物可能直接通过固相萃取柱而不被吸附,故也不可能在后续的分析步骤中被检测到。
 
当使用液相色谱-质谱法(LC-MS)时,基质会抑制或增强目标分析物的信号。因此如果干扰物质不能使用SPE技术很好的消除的话,那么其他的预处理步骤就显得尤为必需了,如:液-液萃取技术常用来去除油、脂肪或油脂;离子交换技术常用来脱盐,或使用非极性吸附剂去除无机盐;通过调节pH值、超滤或沉淀等操作来去除那些会结合分析物的蛋白质等。
 
如果出现回收率较之前下降或波动较大的情况,你应该检查一下使用的吸附剂,这可能是由于使用的吸附剂批次不同导致的。
 
 
 
当出现重现性变差、柱故障(如高背压或保留时间发生改变)以及定量不准等现象,那就需要进一步对样品进行净化。
 
解决这个问题可采用的方法是改变原来的洗涤方案,或使用具有相同萃取机理的其它吸附剂,或完全改变萃取方法。
 
洗涤溶剂应该具有这样的机制:可洗脱最大量的干扰物质而分析物不被洗脱。
 
淋洗步骤也可以通过使用分析物不可溶的溶剂来改善——然而,惊人的净化效果则可能是通过使用非极性的与水不互溶的溶剂,如二氯甲烷、乙酸乙酯或己烷来实现。
 
这些溶剂具有很强的非极性机制的洗脱特性(如它们可以洗脱许多干扰物),而分析物将被牢牢地保留在吸附剂表面。洗脱溶剂也可以调整,较弱的溶剂也可能获得更纯净的提取物,但同时需要关注对分析物回收率是否造成影响。
 
如果即使改变了洗涤溶剂但仍然不能获得理想的纯净的分析物,可以尝试改变吸附剂。 例如,如果采用C8吸附剂、低保留力的C4或C2吸附剂等,它们对基质成分的吸附能力都比较差。然而,同时你也必须确保样品能充分地吸附在固定相上。
 
提高样品纯净度的最后一个方法是彻底改变萃取机理。
 
合适的替代品可以用来开发和确定具有潜在的可用机制的方法。目前有一种很有效的技术就是采用混合机制的提取技术来替代传统的单一机制的提取技术。这种方法最适合用于提取既含有极性基团又含有非极性基团的分析物。
 
 
本文图片来源自网络
 
原文出处:《LCGC》2017年第1卷P50
译者:兔子小光
译自:chromatographyonline
来源:材料与测试

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